换一批
换一批N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶的融合表达、纯化和酶活性
Fusion expression, purification and enzymatic activity of D-carbamoylase
摘要将菌株 SS-ori的 N-氨甲酰- D-氨基酸酰胺水解酶基因( Dcase)插入到 pMAL- c2X载体中,构建表达产物为麦芽糖结合蛋白( MBP)与 Dcase融合的重组子.该重组子在 E.coli BL21中的表达产物为融合蛋白 MBP- Dcase (76.4ka),光密度扫描表明,其表达量约占菌体超声后离心上清总蛋白的 19%.经 Amylose亲和纯化和 Superose 12凝胶排阻层析后达到了电泳纯.根据 pMAL- c2X的背景,用 Factor Xa剪切后,可得约 41.7ka的 MBP和 34.7ka的 Dcase.酶活性检测表明当用 N-氨甲酰- DL-缬氨酸做为底物 ,A600=10时,每升菌体每小时可产生 D-缬氨酸 0.78g.
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