换一批以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用
Development and application of a high-throughput screening assay for inhibitors of human FK506 binding protein 52
摘要目的 发现新的FKBP52抑制剂类药物,建立以人FKBP52为靶点的高通量药物筛选模型.方法 通过大肠埃希菌表达系统重组表达FKBP52蛋白,并进行纯化.基于FKBP52的肽基-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)的活性特性,建立FKBP52高通量药物筛选体系.对本公司化合物库中的31558个放线菌及真菌次级代谢产物粗提物进行筛选.结果 成功构建重组表达菌株BL21 (rosetta)/pET-30a/FKBP52.纯化后的重组表达人FKBP52蛋白纯度大于90％,并具有很好的PPIase活性.阳性药FK506能剂量依赖地抑制FKBP52活性,IC5o为12.035ng/mL.筛选得到121个抑制率大于80％的样品,其中11株放线菌的次级代谢产物中含FK506,6株放线菌的次级代谢产物中含FK520,7株放线菌的次级代谢产物中含雷帕霉素.对随机抽取的100块96孔板筛选数据进行统计,模型的信号/本底比平均值为2.35±0.26,Z'因子平均值为0.78±0.1.结论 本研究成功建立了人FKBP52抑制剂高通量药物筛选模型,该方法具有快捷、灵敏度高、稳定性好的特点,不仅可以快速进行新FKBP52抑制剂的筛选,还可以实现对FKBP52已知抑制剂如FK506、FK520和雷帕霉素等产生菌的定向筛选.
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关键词
FK506结合蛋白52FK506FK520雷帕霉素高通量筛选抑制剂FK506 Binding Protein 52FK506FK520RapamycinHigh-throughput screeningInhibitor
医学主题词
蛋白(Egg White)药物评价, 临床前(Drug Evaluation, Preclinical)西罗莫司(Sirolimus)高通量筛选分析(High-Throughput Screening Assays)代谢(Metabolism)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-8689.2018.01.003
发布时间
2018-04-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中央引导地方科技创新专项（No.169676404G）
:石发改高技999号项目
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