猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究

Production of decellularized porcine, leporine and murine renal biological scaffold and co-culture exploration of renal scaffolds slices with cells in vitro

摘要目的灌注制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾去细胞生物支架,探究三种肾支架对共培养种子细胞HEK的影响.方法取健康成年家猪10 头、新西兰白兔28 只、SD大鼠28 只,分别将取出的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1％ Triton X-100和1％ SDS溶液完成去细胞化.两组肾分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质.去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量作灰度分析.结果家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性,Masson 染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I 和Collagen IV 荧光染色阳性,电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组弹性模量与正常组肾弹性模量差异无显著性,支架组PCNA/DAPI值均高于空白对照组,而三种支架组之间PCNA/DAPI 值无显著性差异.结论本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的三维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备三者肾去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性.

作者王新旺 ^[1] 周乐斌 ^[2] 梅劲 ^[2] 张德明 ^[3] 刘丹 ^[4] 杜奥玲 ^[4] 陈胜华 ^[4] 学术成果认领

作者单位南华大学医学院应用解剖与生殖医学研究所,湖南衡阳 421001; 中国人民解放军69250部队,乌鲁木齐 830000 ^[1] 温州医科大学解剖学教研室,浙江温州,325035 ^[2] 浙江大学机械工程学院,杭州,310058 ^[3] 南华大学医学院应用解剖与生殖医学研究所,湖南衡阳,421001 ^[4]

关键词去细胞生物支架肾再生共培养组织工程 Decellularization Biological scaffold Kidney regeneration Co-cuture Tissue engineering

主题词细胞(Cells)支架(Stents)肾(Kidney)猪(Swine)兔(Rabbits)

分类号 R318.5

栏目名称 实验研究

DOI 10.13418/j.issn.1001-165x.2018.02.011

发布时间 2018-08-30

基金项目

国家自然科学基金项目