换一批一种改良的原代神经元牵张损伤模型的构建与评估
Construction and evaluation of a modified stretch injury model of primary cultured neurons
摘要目的 探讨原代神经元牵张损伤模型的改良方法及其可行性.方法 提取出生24h内SD乳鼠皮层组织进行原代神经元培养,利用智能真空负压机和弹力膜培养板对经典的神经元牵张损伤模型(CICⅡ模型)进行改良,根据弹力膜形变距离将细胞分为对照组(只种植细胞,不做牵张损伤)、轻度损伤组(形变距离7mm)、中度损伤组(形变距离10 mm)和重度损伤组(形变距离13 mm).显微镜观察细胞形态变化,NeuN免疫荧光染色鉴定细胞纯度;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白(cleaved Caspase-3、Bcl-2)表达,比色法测定培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 原代神经元培养5d,显微镜下观察发现细胞生长良好,NeuN染色显示神经元纯度在95%以上.中度损伤后即刻,显微镜下发现神经元轴索断裂,部分细胞呈空泡样变.与对照组相比,损伤组cleaved Caspase-3表达水平、细胞培养液LDH水平均明显上升(P<0.05),而Bcl-2表达水平明显下降(P<0.05).损伤组cleaved Caspase-3表达水平、细胞培养液LDH水平与伤程度呈明显正相关(P<0.05),而Bcl-2表达水平与伤程度呈明显负相关(P<0.05).结论 新生大鼠皮层体外培养所获原代神经元纯化率较高.本研究改良模型可模拟神经元损伤,使用方便、可重复性好,适合颅脑损伤和细胞力学研究.
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关键词
颅脑损伤原代神经元牵张损伤模型方法改良可行性SD乳鼠Traumatic brain injuryPrimary neuron cultureStretch injury modelModificationFeasibilitySD rats
分类号
R651.1+5
栏目名称
DOI
10.13798/j.issn.1009-153X.2023.09.010
发布时间
2024-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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