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CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

Construction of human CYP2C19 gene polymorphism eukaryotic expression vector and establishment of stably transfected HepG2 cell line expressing human CYP2C19

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摘要目的:构建细胞色素P450 CYP2C19*1、*2、*3真核表达载体,并分别转染人肝癌细胞(HepG2),建立高表达目的基因的稳定转染细胞系.方法:应用化学合成法合成CYP2C19*1(野生型)序列,再以此为模板,体外定点突变PCR法构建*2、*3(突变型).DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(-),经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后,脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测CYP2C19*1、*2、*3 mRNA以及蛋白的表达.结果:成功构建了pcDNA3.1(-)-CYP2C19*1、*2、*3表达质粒,并建立了相应稳定转染细胞系.进一步的RT-PCR和Western Blot检测结果表明,目的基因均得到了稳定的表达.结论:人CYP2C19*1、*2、*3稳定表达细胞系为研究创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测以及为临床潜在药物相互作用提供了有效实验平台.