左旋一叶萩碱诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬机制的研究

L-Securinine induced the human non small cell lung cancer A549 cell autophagy and its molecular mechanism

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摘要目的:研究左旋一叶萩碱诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制.方法:常规体外培养人非小细胞肺癌A549细胞株,取对数生长期的细胞传代24 h后加入不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200 μmol/L)左旋一叶萩碱处理,分别继续培养24、36、48 h后,用CCK-8法测定细胞增殖活性;倒置显微镜下观察对照组和各实验组的细胞形态变化;分别用不同浓度(0、20 μmol/L)左旋一叶萩碱作用A549细胞48 h后,进行单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,分别通过荧光显微镜检测细胞自噬发生情况;荧光定量RT-PCR法检测Beclin 1在mRNA水平表达变化情况.结果:左旋一叶萩碱可以抑制A549细胞增殖,并且呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).其中,21.204 μmol/L左旋一叶萩碱作用A549细胞48 h后,细胞死亡率接近50％;倒置显微镜观察到药物作用后细胞形态发生了明显变化;随着左旋一叶萩碱剂量增加,MDC阳性细胞的荧光强度及细胞内MDC荧光颗粒数目明显增加.另外,研究还发现随着药物浓度的上升,自噬基因Beclin 1的表达明显增强.结论:左旋一叶萩碱具有抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖、诱导细胞自噬性凋亡,其作用具有浓度和时间依赖性.左旋一叶萩碱上调自噬基因Beclin 1 mRNA的表达水平可能是其诱导A549细胞自噬性凋亡的机制之一.