长链非编码RNA GNAQ-ASI在高雄激素多囊卵巢综合征中的机制研究
Mechanism of lncRNA GNAQ-AS1 in high androgen polycystic ovary syndrome rats
摘要目的 探讨长链非编码RNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控细胞分裂周期与凋亡调节蛋白2(CDCD2)在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的作用及其机制.方法 在细胞水平上,分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测 LncRNA GNAQ-AS1 和 miRNA-20b-5p 的最佳抑制浓度,以Transwell小室检测细胞的迁移情况,并通过流式细胞术检测细胞周期.在动物水平上,将大鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组、miRNA-20b-5p mimics组,每组10只.模型组连续灌服溶于1%羧甲基纤维素的来曲唑1 mg·kg-1·d-1,共3周,每周3次;lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组在模型建立的基础上,用siRNA沉默lncRNA GNAQ-AS1表达,每周注射1次,共3周;miRNA-20b-5p mimics组在模型建立的基础上,用miRNA-20b-5p mimics过表达miRNA-20b-5p,尾静脉注射给药,给药量为1 mg·kg-1,每周注射1次,共3周.对照组注射等体积的0.9%NaCl.用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、血清抗缪勒管激素(AMH)、促卵泡生长激素(FSH)表达水平,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测卵巢组织中 lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p 和CDCD2的表达情况,用蛋白质印迹法检测CDCD2蛋白表达水平.结果 CCK-8检测结果表明,当给予 5 μmol·L-1 lncRNA GNAQ-AS1 siRNA时,对照组和lncRNA GNAQ-AS1组的细胞存活率分别为(38.25±0.62)%和(86.14±3.13)%,当给予 10 μmol·L-1 miRNA-20b-5p mimics 时,对照组和miRNA-20b-5p mimics组的细胞增殖抑制率分别为(40.70±0.32)%和(85.35±2.13)%,表明 KGN 细胞给予 10 μmol·L-1 miRNA-20b-5p mimics时细胞活力明显降低.在动物水平上,RT-qPCR结果显示:模型组的lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p 和 CDCD2 mRNA 的表达分别为 1.72±0.37、0.59±0.10 和 2.47±0.13,表明 lncRNA GNAQ-AS1、CDCD2 的表达水平在模型组中明显上调,miRNA-20b-5p表达水平较于对照组下调(P<0.05).与对照组相比,模型组大鼠血清LH、T和AMH水平明显升高,FSH和E2水平明显降低(均 P<0.05).与模型组相比,lncRNA GNAQ-AS1 siRNA 组和 miRNA-20b-5p mimics组LH、T和AMH水平显著降低,FSH和E2水平显著升高.与模型组相比,CDCD2 蛋白表达水平在 lncRNA GNAQ-AS1 siRNA 组和 miRNA-20b-5p mimics组均显著升高.结论 LncRNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控CDCD2在PCOS中发挥重要作用.
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