换一批SH-SY5Y神经细胞中尼古丁受体α3亚单位基因表达抑制与APP代谢的关系
Correlation between inhibited gene expression of nicotinic acetylcholine receptor α3 subunit in SH-SY5Y cells and APP metabolism
摘要目的 用RNA干扰技术抑制神经型尼古丁受体(nAChR) α3亚单位基因表达并观察对神经细胞淀粉样蛋白前体蛋白(APP)代谢的影响.方法 设计并体外合成α3 nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸,退火后克隆至pSliencer 3.1-H1 neo质粒中,构建重组质粒α3 nAChR pSilencer 3.1-H1 neo.将α3 nAChR pSilencer 3.1-H1 neo转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测转染细胞中α3 nAChR mRNA 及蛋白表达水平的变化;并测定分泌型 APP、总 APP 蛋白表达的变化.结果 成功构建α3 nAChR siRNA表达质粒,转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α3 nAChR mRNA 及蛋白表达量均降低(抑制率分别为98%和66%);分泌型APP表达下降,总APP水平比较表达水平无显著性差异.结论 α3 nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3 nAChR 基因表达,α3 nAChR可能通过增加α-分泌酶对APP的切割发挥神经保护作用.
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关键词
siRNAα3神经型尼古丁受体神经母细胞瘤细胞淀粉样蛋白前体蛋白Silence interference RNAα3 nAChRNeuroblastoma cellAmyloid precursor peptide
分类号
R741.02（神经病学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-9202.2009.21.021
发布时间
2010-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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