换一批
换一批摘要目的 建立MORF4基因高表达诱导HeLa细胞衰老模型,探索MORF4基因对HeLa细胞衰老的影响.方法 分别将pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4和pcDNA3.1(+)空载质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株.SA-β-Gal染色检测细胞衰老,MTT法及流式细胞术检测细胞周期变化及细胞的增殖活力,两者共同确定MG-132处理的最适条件.Western印迹检测MORF4、PCNA基因的表达.结果 质粒经酶切和测序鉴定,证明pcDNA3.1(+ )/Flag-MORF4质粒中含有目的基因序列；经浓度梯度l.25、2.5、5、10 μmol/L MG-132处理转染细胞2、4、24、48 h后,SA-β-Gal染色和MTT 检测结果显示10 μmol/L MG-132处理24 h的转染细胞明显衰老,细胞活力降低；细胞周期被阻滞在Go/G1期,S期细胞明显减少,增殖受到抑制；Western印迹检测结果显示MORF4蛋白在细胞中的含量明显升高,而与增殖相关基因PCNA表达下调.结论 构建的pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4 质粒在HeLa细胞中表达；并在MG-132作用下,使MORF4基因的表达产物积累,从而影响PCNA蛋白的表达量,抑制HeLa细胞的增殖活性,阻滞细胞周期的进行,导致细胞进入衰老状态.
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