换一批
换一批TaqMan荧光定量PCR检测1型登革热病毒及临床应用
Establishment of TaqMan probe-based fluorescence quantitative PCR for Dengue virus type 1 and its clinical application
摘要目的 建立登革热1型病毒(DV1)TaqMan荧光定量PCR快速检测方法及应用于临床诊断.方法 根据DV1 5'端非编码区基因保守序列,设计一套特异性引物和TaqMan探针.用4个血清型DV标准毒株为对照,收集40份DV1临床血清为检测标本.通过对DV1标准毒株RT-PCR后,采用体外转录方式获得RNA模板作为阳性对照,检测所建立TaqMan荧光定量PCR方法的特异性.取DV-IgM/IgG用ELISA检测患者血清,将TaqMan荧光定量PCR和DV-IgM/IgGELISA进行敏感性比较.结果 所建立方法的最低检测限约为每反应10个基因拷贝.发病后不同时间采集的登革热患者血清标本检测结果为:发病1～3 d的患者RT-PCR阳性检出率最高(81.25%);4～6d ELISA-IgM检出率最高(85.00%);7 d后ELISA-IgG检出率最高(75.00%).结论 在登革热的早期诊断中建立的RT-PCR具有较高的敏感性、特异性和重复性,可作为DV1的快速诊断方法.
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