腺病毒介导外源基因经动脉转染大鼠腹壁浅动脉岛状皮瓣的研究

Adenovirus mediated exgenous gene transfect rat's SIEA flap by intra-artery perfusion

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摘要目的:探讨腺病毒载体介导外源基因经动脉灌注转移修饰大鼠腹壁浅动脉岛状皮瓣(Superficial inferior epigastric artery flap,SIEA)的可行性、安全性并对其转染条件作出评价.方法:本研究通过血管夹暂时夹闭形成局部封闭环境,应用腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因(Ad5-CMV-EGFP)经动脉灌注带蒂SIEA 60min.60只SD大鼠随机分为6组:A、B、C、D组分别为:3.0×106、3.0×107、3.0×108、3.0×109pfu/ml,E组:PBS、F组:腺病毒空载体.术后7天应用活体荧光成像系统观察皮瓣的荧光强度,应用共聚焦显微镜、RT-PCR检测皮瓣组织中EGFP的表达和分布情况,通过组织学分析对皮瓣的安全性影响.结果:术后7天B组、C组、D组活体观察皮瓣可见体表绿色荧光信号.共聚焦显微镜观察结果与活体观察结果一致,EGFP在皮瓣内血管内、外膜均可见表达,血管周围组织包括脂肪、毛囊可见EGFP表达,皮瓣外组织未见EGFP表达.对照组E组、F组未见EGFP表达.RT-PCR结果显示,EGFP仅在皮瓣内表达,其他重要脏器(心脏、肝脏、肾脏)无表达.对皮瓣组织学观察未见明显炎症反应.结论:复合组织瓣转移修复创面是一种成熟的手术方式.本研究从大体观察、组织形态学和分子生物学三方面评价外源基因经动脉内灌注转染大鼠带蒂皮瓣的可行性,为进一步深入研究基因修饰复合组织瓣,使其发挥治疗性修复创面作用提供理论依据