换一批
换一批摘要目的:培养人血管瘤内皮细胞(HemECs),利用RNA干扰技术下调HemECs中VEGF的表达,观察其对血管瘤内皮细胞的影响.方法:利用组织块法培养HemECs,鉴定、筛选和纯化后,分为A、B、C三组,分别为转染组、空脂质体组和对照组.利用脂质体法将pGCsiU6/Neo/dsRED-VEGF真核表达质粒转染到内皮细胞中.通过荧光显微镜大体观察转染效率和细胞生长情况、ELISA法检测细胞分泌VEGF蛋白和MTT法检测质粒转染对HemECs的影响.结果:转染组第五天转染细胞达到总细胞80%以上,但是细胞凋亡逐渐增加.第七天细胞稀少,漂浮死细胞增多.转染阳性细胞减少,细胞整体状态差.转染组培养上清中VEGF蛋白浓度在转染的第1、3、5、7天分别为141.3±7.82、92.34±5.71、68.07±5.95及40.65±6.71pg/ml.MTT法检测各组490nm的OD值在1、3、5、7天均有统计学差异(P＜0.05).结论:转染后的细胞活性降低,通过对其分泌的VEGF蛋白的测量发现,转染组VEGF蛋白明显下降,同时,细胞活力受到影响,漂浮的死细胞增多.这些都可以说明,VEGF在血管瘤内皮细胞生长、增殖之中起着非常重要的作用,这也为我们治疗血管瘤提供一个新的靶点.
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