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肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165双基因疗法加速皮肤全层缺损创面愈合的实验研究

Experimental Study on Hepatocyte Growth Factor/Vascular Endothelial Growth Factor 165 Dual Gene Therapy for Accelerating Wound Healing of Skin Defects

摘要目的:探讨以腺病毒为载体的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165(Ad-HGF/VEGF165)双基因疗法在促进皮肤全层缺损创面愈合中的作用.方法:体外构建HGF/VEGF165双基因腺病毒载体,取30只雄性SD大鼠随机分为3组,Ad-HGF/VEGF165治疗组、Ad-VEGF165治疗组和空白对照组,每组10只,于大鼠背部正中制作直径为3.0 cm圆形全层皮肤缺损创面模型.造模成功后,距创缘外侧5 mm处,于3、6、9、12点方位,治疗组分别注射病毒滴度为2×108 PFU/ml的Ad-HGF/VEGF165溶液、Ad-VEGF165溶液,对照组注射等量0.9%氯化钠溶液,注射深度为浅筋膜层,每点注射量0.25 m1,总量1 ml;分别观察三组7 d、14 d、21 d创面愈合率,治疗后第7天创缘组织HE染色情况,治疗后3 d、7 d、14 d免疫组化观察微血管密度(MVD)及VEGF表达情况;Western blot法测定VEGF蛋白表达水平.结果:三组创面治疗后7 d、14 d、21 d愈合率实验组高于对照组,且Ad-HGF/VEGF165组优于Ad-VEGF165组,差异有统计学意义(P<0.05);三组创面不同时间点(治疗后3 d、7 d、14 d)免疫组化测得VEGF表达水平及Western blot测定VEGF蛋白表达量均高于对照组,Ad-HGF/VEGF165组高于Ad-VEGF165组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:Ad-HGF/VEGF165双基因疗法和Ad-VEGF165单基因治疗均能有效加速创面愈合,双基因疗法效果更为显著,其加速创面愈合可能机制为增加创面VEGF表达量、加速血管新生、改善创面愈合微环境,加速上皮化.

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