换一批
换一批嵌合抗CD20抗体Fab片段在大肠杆菌中表达及活性鉴定
High expression of the chimeric antibody Fab against-CD20 in E.coli and bioactivity determination
摘要目的:构建抗CD20嵌合抗体Fab片段表达载体,并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达.方法:利用PCR方法从抗CD20单链抗体(ScFv)表达载体上扩增抗CD20抗体轻链可变区基因(VL)、重链可变区基因(VH),然后将VH、VL基因重组到Fab表达载体pYZF中,构建抗CD20Fab表达载体pYZF1cd20,并在27C7菌中高效表这.结果:经Fab表达载体转化的27C7菌株,进行表达培养,经分离纯化获得具有CD20特异结合活性的Fab片段,竞争性免疫荧光抑制实验表明,表达产物Fab片段能竞争性抑制鼠源性抗CD20抗体HI47和CD20表达细胞Raji细胞结合.结论:在大肠杆菌中高效可溶性分泌表达有活性的抗CD20嵌合抗体Fab片段.
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