换一批丙肝病毒(HCV)及乙肝病毒(HBV)双表达载体的构建及表达
Constructs and expression of hepatitis C virus core gene combined hepatitis B virus core gene with two multiple cloning sites vector
摘要目的:为探索HCV/HBV高效联合基因免疫策略,构建具有2套独立表达单元的HCV/HBV真核表达载体.方法:分别将与HCV核心区基因互补的cDNA和HBV核心区基因克隆于具有2套独立表达单元的真核表达载体pRSC的巨细胞病毒启动子和RSV启动子下游,称为pRSC-HBV/HCV,转染SP2/0细胞,通过免疫荧光和Western印迹法观测蛋白的表达,免疫Balb/c小鼠, 用酶联免疫小鼠体液免疫应答.结果:pRSC-HBV/HCV转染SP2/0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞,SDS-Page电泳显示在14 kD及21 kD处均可见蛋白条带,与HBcAg及HCV核蛋白的的理论预期值一致,Western印迹分析显示在14 kD及21 kD处可见特异性的蛋白条带.5只免疫鼠中全部出现抗-HCV及抗-HBV抗体,而对照组全阴性.结论:pRSC-HBV/HCV可分别表达HBcAg及HCV核蛋白,免疫Balb/c小鼠后可诱导其体液免疫应答,为进一步开展HCV/HBV联合基因免疫奠定了实验基础.
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