换一批
换一批抗血小板糖蛋白Ⅵ单克隆抗体的制备及其功能研究
Preparation and characterization of a monoclonal antibody directed against platelet glycoprotein Ⅵ
摘要目的:制备抗血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)单克隆抗体,观察其在体外抗血小板黏附和聚集功能.方法:采用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ胞外区重组蛋白(rGPⅥ).以rGPⅥ免疫小鼠,经细胞融合及筛选后制备抗GPⅥ单克隆抗体.采用血小板聚集实验观察该单抗对胶原、Convulxin及ADP诱导的血小板聚集的影响;利用平行板流动小室技术研究在高剪切力条件下该单抗对血小板在胶原表面黏附的抑制效果.结果:正确构建了rGPⅥ表达载体pET-20b(+)-GPⅥ,rGPⅥ在原核细胞中有效表达.rGPⅥ能够被抗Penta-His单抗和抗GPⅥ多抗识别.制备的抗GPⅥ单克隆抗体SZ118能够识别rGPⅥ,并与血小板有特异的结合能力.SZ118能明显抑制纤维状胶原和Convulxin诱导的血小板聚集,呈抗体剂量依赖性;对ADP诱导的血小板聚集无明显影响.血小板黏附实验表明,SZ118能够明显阻断在高剪切力条件下血小板与纤维状胶原表面的黏附.结论:成功制备抗GPⅥ单克隆抗体SZ118,该抗体与血小板有良好的结合能力,显著抑制胶原诱导的血小板聚集并明显降低血小板与胶原的黏附反应.
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