换一批PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析
Construction of co-expression vector of pVAX1-PIG and expression of granzyme B and perforin in human Hep-2 cell line
摘要目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG(即 pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况.方法:利用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG.利用脂质体LipofectamineTM2000将重组真核表达载体pVAX1-PIG转染入人的Hep-2细胞株中,采用RT-PCR、间接免疫荧光法分析其在人Hep-2中的表达情况.结果:经双酶切、测序法证实已成功扩增PFP、GrB基因的全长cDNA,并构建共表达重组体pVAX1-PIG,在荧光显微镜下可见已转染pVAX1-PIG的人Hep-2细胞的胞浆发出苹果绿色荧光.结论:成功扩增PFP、GrB全片段、构建共表达重组体pVAX1-PIG,并在人Hep-2细胞中检测到PFP、GrB蛋白的表达,穿孔素(PFP)/颗粒酶B共同表达能够介导细胞的凋亡,为其在喉癌治疗中的应用研究奠定了基础.
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