换一批
换一批抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定
Construction,expression and characterization of TfR scFv-SLC fusion protein
摘要目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白.方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因.以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfR scFv-SLC融合蛋白的表达.SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性.FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性.结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350 bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfR scFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功.IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41 kD的条带,符合scFv-SLC理论值.FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfR scFv有所提高.结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合.
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主题词
蛋白(Egg White)受体, 转铁蛋白(Receptors, Transferrin)单链抗体(Single-Chain Antibodies)淋巴组织(Lymphoid Tissue)细胞(Cells)
分类号
Q816
栏目名称
发布时间
2010-01-04
基金项目
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目（2006AA02Z158）；
教育部博士点专项资金（20060487024）；
新教师基金课题（20070487103）；
湖北省卫生厅重点科技攻关项目（JX3A02）
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