换一批重组HMGB1-A盒蛋白对小鼠单核细胞的抗炎作用
Anti-inflammatory action of recombinant mouse HMGB1-A box in RAW264.7 cells
摘要目的:观察高迁移率蛋白B1-A盒蛋白(HMGB1-Abox)对小鼠单核细胞系在脂多糖(LPS)刺激下表达HMGB1的影响和动态变化以及对炎性因子分泌的抑制作用.方法:利用克隆载体构建PET28a-HMGB1-Abox原核质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)诱导后经Ni~(2+)-NTA树脂亲和纯化得到目的蛋白;以不同浓度的重组HMGB1Abox蛋白作用于LPS刺激的小鼠单核细胞系RAW264.7,CCK8试剂盒检测其对小鼠单核细胞活力的影响.以PBS和重组HMGB1-Abox蛋白为对照组和实验组,于2、6、12、24、48小时检测其细胞上清中的TNF-α、IL-1β的含量,Western blot、免疫荧光法观察细胞中HMGB1的表达、RT-PCR检测细胞中HMGB1-mRNA变化趋势.结果:成功构建PET28a-HMGB1-Abox原核质粒并纯化出大约为14 kD的目的蛋白.小鼠单核细胞活力与重组HMGB1-Abox蛋白浓度及作用时间呈正相关;实验组细胞上清TNFα、IL-1β的含量较对照组显著下降;Western blot及免疫荧光检测提示实验组细胞中HMGB1表达不断减少;细胞中HMGB1-mRNA含量及峰值均较对照组显著减少且延后.结论:重组HMGB1-Abox蛋白可以显著减少小鼠单核细胞在受到LPS刺激时HMGB1的表达和分泌,从而有效的阻断HMGB1对其他早期炎性因子的促进作用,减少炎性因子的分泌,有较强的抗炎作用.
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关键词
HMGB1-A盒蛋白原核构建蛋白纯化小鼠单核细胞系Recombinant protein HMGB1-AboxProkaryotic expression vector constructionProtein purificationRAW264.7
分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2010.04.003
发布时间
2010-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2007CB512900）
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