换一批牛奶主要过敏原αs1-酪蛋白全长与片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定
Cloning,expression and immunogenicity of the full-length and fragments of major milk allergen αs1-casein
摘要目的:克隆并表达牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的全长及N端、C端两个片段区基因,用于筛选与制备牛奶主要过敏原的单克隆抗体.方法:利用RT-PCR技术克隆αs1-酪蛋白基因,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3).经IPTG诱导表达,获得重组αs1-酪蛋白.用Ni2+亲和层析柱纯化,用 Western blot和ELISA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性.结果:克隆获得αs1-酪蛋白全长的开放阅读框基因为645 bp(含终止密码子),编码214个氨基酸.N、C端片段区基因(含终止密码子)分别为285、294 bp,编码94、97个氨基酸.三种重组蛋白均能以可溶性表达形式纯化,经Western blot和ELISA检测都具有较好的免疫原性,而αs1-酪蛋白全长的免疫原性更强.结论:成功地克隆和表达了αs1-酪蛋白全长及N、C端两个片段区基因,为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体,制备牛奶主要过敏原的检测试剂奠定了基础.
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