换一批
换一批人源化抗肾小球基底膜抗体的单链抗体scFv3的原核表达及鉴定
Expression and characterization of human single chain Fv antibody to anti-glomerular basement membrane (anti-GBM) antibody in Escherichia coli
摘要目的:在原核细胞中构建并表达抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3,并鉴定其活性.方法:用PCR扩增抗GBM抗体单链抗体scFv3基因,将scFv3 DNA与pGEM-T Easy质粒连接,构建克隆载体pGEM-scFv3.用酶切后电泳鉴定构建载体的正确性;测序检测质粒重组后序列有无改变.再将scFv3亚克隆入表达载体pQE-80L,构建pQE80L-scFv3重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta2,酶切鉴定.IPTG诱导表达蛋白后,通过SDS-PAGE 和Western blot鉴定表达产物的抗体活性.结果:PCR扩增scFv3 DNA片段约为750 bp,与预期结果相同;克隆载体pGEM-scFv3酶切后显示scFv3成功的克隆入pGEM-T Easy质粒;测序验证插入片段全序列无改变;表达载体pQE80L-scFv3酶切图谱与预期相同;SDS-PAGE显示,在分子量约为27 kD处可见目的蛋白带,Western blot证实scFv3能与抗GBM抗体结合.结论:成功构建并表达了抗GBM抗体的单链抗体scFv3蛋白,为进一步研究scFv3的生物学特性和基因工程抗体的制备奠定了基础.
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主题词
抗体(Antibodies)单链抗体(Single-Chain Antibodies)肾小球基底膜(Glomerular Basement Membrane)人(Persons)质粒(Plasmids)
分类号
R392.11
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2011.01.012
发布时间
2011-04-27
基金项目
本文为国家卫生部资助项目（WKJ2007-2-033）；
河南省医学科技攻关重大项目（200701006）
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