换一批野生型和突变型人白介素13哺乳细胞表达质粒的构建1
Construction of the wild-type and mutant interleukin-13 expression plasmids in mammalian cells
摘要目的:构建野生型及突变型人IL-13(hIL-13)哺乳细胞表达质粒.方法:采用融合PCR扩增人生长激素(hGH)-hIL13融合蛋白编码序列.PCR产物和pcDNA3.1表达载体经Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ双酶切处理后,将PCR产物定向插入pcDNA3.1真核表达载体中,构建质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g.将其转化到DH5α感受态细胞内进行扩增,阳性克隆鉴定,质粒抽提,进行测序验证.结果:重组质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g经测序验证,hGH-hIL13融合蛋白编码序列与实验设计一致,且已与pcDNA3.1(+)真核表达载体正确重组.结论:成功构建了哺乳细胞表达质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g,为后续野生型及突变型hIL-13哺乳细胞的重组表达奠定了基础.
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分类号
R392.12（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2011.11.002
发布时间
2011-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金项目资助（(30872805、30972750)）
上海市科学技术委员会科研计划项目资助（(08411953200)）
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