换一批
换一批志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备
Expression and purification of Apyrase from shigella flexneri M90T and preparation mice polyclonal antibody against Apyrase
摘要目的:克隆编码志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的基因phoN2并实现表达,纯化后免疫BALB/c小鼠制备鼠抗Apyrase的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行评价.方法:通过PCR扩增的志贺菌5a M90T中的基因phoN2克隆至表达载体pET24a中,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达并纯化Apyrase-HIS融合蛋白.以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多抗.Western blot、ELISA、免疫荧光鉴定获得的抗血清.结果:成功构建了原核表达载体pET24 a-Apyrase,经诱导表达出相对分子量为28 kD的融合蛋白,用纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备的多克隆抗体,通过Western blot、ELISA、免疫荧光法证明多克隆抗体制备成功.结论:成功制备了志贺菌福氏5a特异性的鼠多克隆抗体,为进一步研究Apyrase蛋白在志贺菌福氏5a M90T中的表达、定位及志贺菌福氏5a M90T的快速检测奠定了基础.
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