换一批MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定
Expression, purification and immunogenicity analysis of recombinant MPB64 using baculovirus expression system
摘要目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB64穿梭载体，脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒，重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒，收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠并检测血清中抗体滴度，ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度，MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：MPB64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90％以上，蛋白产量为35 mg／L，纯化蛋白能有效刺激BALB／c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量，目的蛋白在0.2～100μg／ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。结论：成功在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达了具有免疫原性的MPB64蛋白，为生产结核病疫苗奠定了基础。
更多相关知识
关键词
MPB64杆状病毒表达系统Sf 9细胞结核分枝杆菌MPB64Baculovirus expression vector systemSf 9 insect cellsMycobacterium tuberculosis
分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2014.07.013
发布时间
2014-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划（863计划）（SQ2011AA100606）
吉林省高层次创新创业引进人才项目
- 浏览247
- 被引1
- 下载9
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
