换一批
换一批小鼠MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系的重建及Hsf1,SV40T-ag蛋白的表达
Reconstitute MEF/Hsf1-/-/Hsf1 mouse cell line and expression of Hsf1, SV40-Tag proteins
摘要目的:重建热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)过表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系,为进一步研究Hsf1的功能提供实验模型.方法:将携带Hsf1全长基因的逆转录病毒载体pWZL-blast-flag-Hsf1,通过瞬时转染的方法,转染产生病毒的小鼠包装细胞293 Phoenix.用病毒上清直接感染MEF/Hsf1-/-细胞,建立Hsf1稳定表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系.通过Western blot实验,检测Hsf1和SV40T抗原(T-antigen,T-ag)蛋白的表达.结果:Hsf1蛋白在MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞中的表达比WT/MEF细胞强,而在MEF/Hsf1-/-细胞中没有明显表达.SV40T-ag蛋白在MEF/Hsf1-/-细胞中的表达明显比WT/MEF细胞和MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞强,而SV40T-ag蛋白在WT/MEF细胞中的表达强于MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞.结论:成功建立了MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系;Hsf1参与了对SV40T-ag蛋白的表达调控.
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关键词
热休克转录因子1SV40T抗原转染逆转录病毒载体小鼠胚胎成纤维细胞Heat shock transcription factor 1SV40T-antigenTransfectionRetroviral vectorMouse embryo fibroblasts
分类号
Q813.2
栏目名称
免疫学技术与方法
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2014.09.016
发布时间
2014-10-24
基金项目
国家自然科学基金
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