减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究

Construction and characterization of host-vector balanced lethal system of attenuated salmonella choleraesuisΔcrpΔcyaΔasdC78-1 (pYA3493)

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摘要目的：开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法：本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaC78-1的基础上，运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术，构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasdC78-1，再将携带asd基因的互补质粒pYA3493电转至上述菌株，构建ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）宿主-载体平衡致死系统，并进一步研究其生物学特性。结果：PCR 及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（ pYA3493）构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）的血清型与亲本株ΔcrpΔcyaC78-1和疫苗株C500相同，并能够稳定遗传缺失型asd基因片段；其生长速度略慢于ΔcrpΔcyaC78-1，且二者均明显慢于疫苗株C500；其生化特性结果也与ΔcrpΔcyaC78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（pYA3493）的毒力与ΔcrpΔcyaC78-1基本相当，但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论：上述结果表明，减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1（ pYA3493）有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。