稳定表达人IFITM3的A549细胞株建立及其对禽流感病毒感染的抑制作用

Establishment of A549 cell stain stably expressing human IFITM3 and its inhibition to avian influenza virus infection

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摘要目的：为深入研究IFITM3抗禽流感病毒作用及其分子机制提供细胞模型，建立稳定表达人IFITM3蛋白的A549细胞株。方法：首先合成引物，分离人外周血单个核细胞，PCR扩增IFITM3基因，进行DNA测序分析。测序正确后，将其克隆至慢病毒表达载体pLV－Puro中构建真核表达质粒pLV－IFITM3，转染A549细胞，在确定IFITM3可表达后，利用嘌呤霉素加压筛选稳定表达IFITM3的细胞株，通过荧光定量PCR和Western blot 方法对获得的稳定细胞株进行鉴定，同时分析IFITM3蛋白在稳定细胞株的分布及其对细胞活性的影响。最后，基于建立的稳定细胞株，用H5N1亚型禽流感病毒作为病毒测试模型，对IFITM3的抗病毒活性进行了初步评价。结果：成功获得人外周血单个核细胞源IFITM3基因，构建了重组慢病毒表达质粒，并通过质粒转染结合嘌呤霉素压力筛选获得稳定表达IFITM3的A549细胞，且IFITM3主要分布在膜组分上，并对细胞活性无显著影响，同时IFITM3可抑制H5N1亚型禽流感病毒感染。结论：成功获得稳定表达IFITM3的A549细胞，证明了IFITM3可抑制H5N1亚型禽流感病毒感染，为进一步深入探讨IFITM3限制流感病毒感染的作用机制和分子机理提供了细胞模型和实验基础。

作者姜颖越 ^[1] 杜寿文 ^[2] 曹婷婷 ^[3] 赵飞 ^[3] 王茂鹏 ^[3] 谭鹏 ^[3] 辛舒 ^[3] 朱羿龙 ^[3] 李文杰 ^[3] 李艳茹 ^[1] 李太元 ^[1] 李昌 ^[4] 金宁一 ^[4] 学术成果认领

作者单位延边大学农学院,延吉,133002 ^[1] 延边大学农学院，延吉 133002;吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130122 ^[2] 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130122 ^[3] 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130122; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009 ^[4]

关键词干扰素诱导跨膜蛋白3 稳定表达禽流感病毒抑制作用 Interferon-inducible transmembrane protein 3 Stable expression Avian influenza virus Restriction

主题词细胞(Cells)禽流感(Influenza in Birds)病毒(Viruses)人(Persons)蛋白(Egg White)

分类号 S855.3

栏目名称 免疫学技术与方法

DOI 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.03.017

发布时间 2016-06-22

基金项目

国家自然科学基金资助项目 吉林省青年科研基金项目 病原微生物生物安全国家重点实验室开放课题( SKLPBS1435)资助。