换一批人Cosmc胞外段蛋白在昆虫细胞Sf-9中的表达与纯化研究
Expression and purification of recombinant human Cosmc extracellular domain in Sf-9 insect cells
摘要目的：：利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达人Cosmc胞外段蛋白，为体外研究Cosmc蛋白的结构和功能奠定基础，同时也为 O-连接糖基化及相关疾病的研究提供思路。方法：采用 Bac-to-Bac 系统，构建重组转移质粒pFastBac1-Cosmc extracellular domain(pFastBac1-Cosmc ED)，转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定，获得重组转座子rBacmid-Cosmc ED。在脂质体介导下，重组病毒感染Sf-9无血清细胞，在Sf-9中表达Cosmc 胞外段蛋白，由于Cosmc N端加有昆虫细胞信号肽HBM( Honey Bee Melittin)且不含有跨膜段，所以Cosmc胞外段蛋白表达后分泌到培养基上清中，通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行检测，并通过Ni-NTA亲和层析柱对其进行纯化分析。结果：SDS-PAGE和Western blot分析显示得到一条分子量约为33 kD的特异性条带，与目的蛋白大小相符，质谱结果进一步证明所得蛋白为Cosmc胞外段蛋白。结论：Sf-9细胞中可成功表达Cosmc胞外段蛋白，为进一步研究Cosmc的结构和功能奠定基础。
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关键词
人Cosmc 胞外段昆虫细胞杆状病毒表达系统表达纯化Human Cosmc extracellular domainInsect cellsBaculovirus expression system ( BEVS)Expression and purifi-cation
分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2016.10.021
发布时间
2016-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
上海市浦东新区科技发展基金创新资金资助（( No. PKJ2012-Y51)）
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