激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用

Impact of TLR5 and NLRC4 activation on proliferation of different breast cancer cell lines

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摘要目的:探究激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用.方法:表达和纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC(同时激活TLR5和NLRC4两条通路)、FliC△90-97(不能激活TLR5通路)、FliC-L3A(不能激活NLRC4通路)和Flic△90-97:L3A(两条通路都不激活).用不同浓度的重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞,72 h后,利用CCK8法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,并计算抑制率.软琼脂形成实验:每孔细胞数为1 000个MCF-7细胞铺于6孔板中,重组鞭毛素蛋白浓度为1μg/ml,培养14 d后,结晶紫染色,显微镜下计数克隆数,计算克隆形成率.结果:四种鞭毛素蛋白在0.1μg/ml的浓度刺激下,对MCF-7细胞的抑制率达到30％,FliC△90-97对MCF-7的抑制作用是剂量依赖的.在lμg/ml时单独激活TLR5的FliC-L3A鞭毛素蛋白的抑制率高于全长的FliC和单独激活NLRC4的FliC△90-97.FliC△90-97:L3A也对MCF-7细胞有抑制作用.四种鞭毛素蛋白对MDA-MB-231细胞在加转染试剂之后才表现出抑制效应.结论:鞭毛素蛋白可以抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,其机制可能是由于分别激活胞膜和胞内的除TLR5和NLRC4以外的其他通路.