换一批以乙肝病毒核心蛋白为载体制备肠道病毒71型非结构蛋白3D单克隆抗体
Preparation of monoclonal antibodies against 3D protein of EV71 based on HBc particles as expression vector
摘要目的:预测肠道病毒71型(EV71)非结构蛋白3D的表位,以HBc蛋白为载体展示多肽,制备并鉴定抗EV71-3D的特异性单克隆抗体(mAb).方法:应用生物信息学方法分析预测出EV71 3D蛋白亲水性和免疫原性指数较高的多肽片段,并运用HBc颗粒型蛋白载体展示肽段,构建多肽融合蛋白,免疫BALB/c雌鼠,通过杂交瘤技术和亲和层析技术制备和纯化抗EV71-3D蛋白的特异性mAb,用间接ELISA、ELISPOT、IFA和IHC对mAb的性质进行初步鉴定.结果:构建表达分别嵌合3D蛋白34～43位氨基酸残基、 61～76位氨基酸残基、151～164位氨基酸残基的HBc重组蛋白,免疫并经过多轮克隆化筛选,获得抗EV71-3D单克隆抗体3E1,其亚类为IgG2a;免疫荧光试验、ELISPOT法和免疫组织化学染色结果显示其可与EV71特异性结合.结论:成功制备可特异性识别EV71的单克隆抗体3E1,为病毒的检测及进一步研究3D蛋白的功能奠定了基础,同时还验证了生物信息学技术与HBc颗粒型载体展示多肽技术相结合可快速高效地制备单克隆抗体.
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关键词
乙肝病毒核心蛋白肠道病毒71型非结构蛋白3D单克隆抗体Hepatitis B virus core proteinEnterovirus 71Non-structural protein 3DMonoclonal antibody
医学主题词
蛋白(Egg White)病毒(Viruses)抗体, 单克隆(Antibodies, Monoclonal)肠(Intestines)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)
分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.013
发布时间
2017-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金项目（(31670933,81371817)）
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