miR-367-3p靶向SMURF1抑制BCG介导的巨噬细胞凋亡和自噬

miR-367-3 p suppresses BCG-mediated macrophage apoptosis and autophagy activation by targeting SMURF1

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摘要目的:本研究旨在探讨miR-367-3p对BCG介导的细胞凋亡和自噬途径的调控的影响及其可能的作用机制.方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,RT-PCR检测miR-367-3p与SMURF1 mRNA的表达;Western blot检测SMURF1、凋亡相关蛋白及自噬相关蛋白表达水平;菌落形成单位(CFU)计数检测BCG生存率;运用ELISA技术检测巨噬细胞凋亡率;双荧光素酶报告系统、RT-PCR及Western blot法验证miR-367-3p与SMURF1之间的靶向调控关系.结果:BCG感染诱导巨噬细胞RAW246.7中miR-367-3p高表达,并呈时间依赖性.此外,下调miR-367-3p明显降低BCG感染的巨噬细胞的存活率,并促进巨噬细胞凋亡,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达且上调促凋亡蛋白Bax的表达水平.另外,抑制miR-367-3p表达明显增加巨噬细胞中LC3-Ⅱ表达水平,同时降低p62的表达量,从而加强细胞的自噬水平.生物信息学分析显示SMURF1是miR-367-3p的靶基因.双荧光素酶报告系统、RT-PCR及Western blot结果证实miR-367-3p可靶向作用于SMURF1-3′-UTR并负调控其表达.结论:下调miR-367-3p通过靶向调控SMURF1可促进巨噬细胞凋亡和自噬进程,进而介导了BCG的免疫逃逸从而抑制胞内BCG的生存,提示miR-367-3p有望成为结核感染的诊断标志物和治疗性疫苗的靶标,可为结核病的基因诊断和治疗提供参考.