SPLUNC1负向调控肺炎克雷伯菌夹膜多糖诱导细胞因子分泌

SPLUNC1 negatively regulates Klebsiella pneumoniae capsular polysaccharide-induced secretion of cytokines in human lung epithelial cells

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摘要目的:观察肺炎克雷伯菌夹膜多糖(CPS)对人肺上皮细胞表达短腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)的影响,并探讨其在介导细胞因子分泌中的作用.方法:培养肺炎克雷伯菌并提取其CPS,将其与体外培养人肺上皮细胞系NCI-H292孵育.实时定量PCR和ELISA检测SPLUNC1蛋白和mRNA表达的影响.提取细胞核蛋白,ELISA测定CPS处理前后NF-κB活性的变化,采用Western blot检测IκB的表达,并采用NF-κB抑制剂PDTC预处理,观察其在SPLUNC1表达中的作用.ELISA检测CPS处理前后培养上清TNF-α和IL-8分泌的变化;并采用siRNA沉默NCI-H292细胞SPLUNC1,观察其对TNF-α和IL-8分泌的影响.结果:实时定量PCR结果显示,0.5～3μg/ml CPS处理后,SPLUNC1 mRNA水平明显增高,并呈一定的剂量依赖性,ELISA也得到了类似的结果.0.5～3μg/ml CPS也能激活NF-κB,主要表现在NF-κB的DNA结合活性增高、IκB表达减少.同时,CPS也能诱导肺上皮细胞分泌TNF-α和IL-8,采用NF-κB抑制剂PDTC预处理细胞后,细胞因子分泌明显减少.此外,采用siRNA沉默SPLUNC1表达后,TNF-α和IL-8的分泌有所增多.结论:肺炎克雷伯菌夹膜多糖可经激活NF-κB诱导人肺上皮细胞系表达SPLUNC1,后者能在一定程度上负向调控TNF-α和IL-8分泌.