换一批冷冻保存对NK细胞活率及其肿瘤杀伤效果的影响
Effects of cryopreservation on viability and tumor killing activity of NK cells
摘要目的:对比新鲜及冻存复苏的NK细胞的存活率及肿瘤杀伤效果,以便评价冻存的同种异体NK细胞作为即用型产品应用于临床治疗的可行性.方法:利用台盼蓝染色法对冻存前、冻存3个月复苏后及复苏后4℃存放24 h时NK细胞进行存活率检测;通过ELISA方法对冻存前后NK细胞IFN-γ表达量检测;利用流式细胞术对其表面活化性受体表达情况进行检测的同时利用RTCA S16系统检测其对A549肿瘤细胞的杀伤作用.结果:冻存复苏后细胞活率为(92.17±1.37)％,复苏后4℃保存24 h后仍为(79.97±1.22)％;新鲜NK和冻存NK细胞的IFN-γ分泌量分别为(5967.0±517.8)pg/ml和(4861.0±941.4)pg/ml,二者未见显著性差异(P>0.05),同时,NK细胞冻存后受体NCR2及NKG2D较冻存前均未有明显下降;对A549细胞的杀伤作用中,效靶比(E:T)为10:1和5:1时,冻存复苏NK的杀伤效果与新鲜培养NK细胞无显著性差异,仅在高效靶比(E:T=20:1)时冻存NK杀伤作用低于新鲜NK的杀伤作用(P<0.05).结论:经过对比研究表明,冷冻保存的NK细胞满足临床应用所要求的活率和高效杀伤肿瘤细胞能力,可以发展成为即用型细胞药物,具有广泛的临床应用前景.
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