换一批
换一批一种基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域的靶向CD19 CAR-T细胞构建及抗白血病的功能研究
Evaluating anti-leukemia efficacy of a new anti-CD19 chimeric antigen receptor T cells using mutated IgG4 long spacer and 4-1BB costimulatory domain
摘要目的:构建一种基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域的靶向CD19 CAR-T细胞(CART19),并在体内和体外证明其抗肿瘤的能力.方法:构建CD19 CAR的逆转录病毒载体,逆转录病毒转导植物血球凝集素(PHA)刺激的健康志愿者T细胞,从而获得CART19细胞;采用流式细胞术和Western blot检测转导效率;采用流式细胞术检测细胞内CD107a和IFN-γ水平,以及CFSE染色后的细胞增殖情况;4 h荧光杀伤实验评估CART19细胞的体外抗肿瘤能力;ELISA法检测共培养上清液的IFN-γ释放水平;建立白血病小鼠模型评估CART19细胞的体内抗肿瘤作用.结果:成功构建了一种新的CART19细胞;CD19+细胞可以特异性刺激CART19细胞表达CD107a和IFN-γ、促进CART19细胞增殖以及分泌IFN-γ;4 h共培养荧光杀伤实验显示CART19细胞对NALM6-GL具有良好的体外抗肿瘤活性;CART19细胞可以显著提高白血病小鼠的生存率.结论:成功构建了可以有效治疗CD19+肿瘤的基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域CART19细胞,为下一步临床治疗奠定了基础.
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