换一批HMGA23'-UTR双荧光素酶报告载体构建及与miR-33b-5p的靶向验证
Construction of HMGA23'-UTR dual luciferase reporter vector and its targeting verification with miR-33b-5p
摘要目的:构建野生型及突变型HMGA2基因3'-非编码区(3'-UTR)的双荧光素酶报告基因载体,验证miR-33b-5p与HMGA2之间的靶向关系.方法:生物信息学相关软件预测miR-33b-5p与HMGA2之间的靶向关系;PCR扩增HMGA2的基因片段,构建HMGA2野生型和突变型双荧光素酶报告载体;将miR-33b-5p和阴性对照物分别与野生型GV272-HMGA2-wt-3'-UTR或突变型GV272-HMGA2-mut-3'-UTR双荧光素酶报告载体共转染293T细胞,然后检测荧光素酶的活性.结果:成功构建野生型及突变型HMGA2基因3'-非编码区(3'-UTR)的双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告系统的结果显示,加入miR-33b-5p可使野生型GV272-HMGA2-wt-3'-UTR的荧光素酶活性降低,但突变型GV272-HMGA2-mut-3'-UTR的荧光素酶活性与对照组相比则未发生显著变化.结论:野生型及突变型HMGA23'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功;miR-33b-5p与HMGA2之间存在靶向关系.
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分类号
R735.2（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2022.24.015
发布时间
2023-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖南省自然科学基金项目（2019JJ50500）
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