摘要目的:乳酸堆积是肿瘤微环境(TME)呈酸性的主要原因之一,巨噬细胞是TME中的重要免疫细胞.本研究筛选乳酸调控小鼠腹腔巨噬细胞M2型极化的关键靶点分子,为巨噬细胞相关的肿瘤免疫治疗提供理论依据.方法:提取小鼠源腹腔巨噬细胞,通过流式细胞术检测F4/80+及CD11b+细胞表达量;将巨噬细胞分为2组,分别用0 mmol/L(对照)、20 mmol/L乳酸的培养基处理24 h后收集细胞,qPCR法检测巨噬细胞IL-10、Arg-1、VEGF、HIF-1等基因的相对表达量;利用转录组测序技术筛选对照组和20 mmol/L乳酸组的差异表达基因(|log2(fold change)|>1),对差异表达基因进行GO及KEGG分析,并利用Cytoscape软件将筛选出的差异表达基因构建互作网络图,根据基因互作节点数筛选出Tpt1及Malat1等关键调控基因.分别将Tpt1、Malat1两个关键基因的siRNA转染至巨噬细胞,抑制两个基因的表达,利用qPCR法检测转染后巨噬细胞CD11c、Arg-1、VEGF等基因的相对表达量.结果:获得的小鼠腹腔细胞中F4/80+及CD11b+细胞的表达量均大于90%,表明成功获得高纯度的小鼠腹腔来源巨噬细胞.与对照组相比,经20 mmol/L乳酸处理后,Arg-1、HIF-1、IL-10和VEGF表达量增加,表明乳酸能促进巨噬细胞的M2型极化.转录组学研究结果发现,20 mmol/L乳酸处理24 h后使巨噬细胞的6 295个基因表达发生变化,差异表达基因主要参与细菌防御反应、胞质基因翻译、核糖体生物合成、胎盘发育等生物过程;涉及的信号通路包括MAPK、PI3K-Akt、NOD样受体等.筛选出关键上调差异表达基因Malat1、Tpt1、Fadd、Gm5900、Gipr等.Malat1或Tpt1表达被抑制后,20 mmol/L乳酸均能上调巨噬细胞中CD11c表达,抑制VEGF、Arg-1表达.结论:乳酸可能通过上调Malat1及Tpt1表达进而促进巨噬细胞的M2型极化.