IL-17D调控CD93+CTL在肺脏肿瘤微环境中的杀伤功能及桔梗的促进作用

IL-17D improves cytotoxic function of CD93+CTL in lung tumor micro-environment and promotion of Platycodon grandiflorum

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摘要目的:探讨IL-17D调控CD93+CTL在肺脏肿瘤微环境(TME)中的杀伤功能及桔梗(PG)的促进作用.方法:采用PG或IL-17D处理小鼠肺脏B16黑色素瘤模型和对照小鼠,观察肺脏肿瘤克隆形成;应用单细胞测序、免疫荧光染色、流式细胞术等方法检测肿瘤小鼠肺脏IL-17D表达变化;采用单细胞测序、流式细胞术等方法分别检测各组小鼠肺脏CD93+CTL含量、细胞表型和功能因子改变(包括CD107a、穿孔素、颗粒酶B、趋化因子CCL2、CXCL9及趋化因子受体CCR2、CXCR3等);利用EL4细胞系,采用Western blot、RT-PCR检测桔梗皂苷D对IL-17D及其转录调控因子NRF2表达的作用.结果:小鼠肺脏CD93+CTL较CD93-CTL高表达穿孔素、CD107a等细胞毒性效应因子和趋化因子受体CXCR3、CCR2等,而颗粒酶B分泌能力无显著差异;小鼠肺脏肿瘤模型中,肺脏IL-17D表达及其CD93+CTL含量明显下降(P<0.001);肿瘤小鼠经IL-17D回补实验,或经PG处理10 d后,肺脏IL-17D和CD93+CTL比例和数量明显增多(P<0.05),肿瘤克隆明显减少.同时,肿瘤局部CD93+CTL募集和功能相关细胞因子CCL2、CXCL9、IL-17D等表达明显上调.PG对IL-17D的上调作用在EL4细胞系体外实验中也得到了验证,桔梗皂苷D可显著上调EL4细胞IL-17D及其转录调控因子NRF2表达.结论:中药PG及其提取物可上调肺脏IL-17D表达,增强肺脏CD93+CTL浸润和杀伤功能,拮抗肿瘤在肺脏的恶性进展,是PG改善肺脏TME的重要药理机制.