换一批
换一批新型抗KPC-2型碳青霉烯酶纳米抗体的筛选与鉴定
Screening and identification of novel anti-KPC-2 carbapenemase-specific nanobodies
摘要目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性.通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持.方法:利用重组KPC-2免疫双峰骆驼,从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,通过两轮嵌套式PCR扩增出纳米抗体片段,构建抗体文库,并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体.通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定.结果:构建了一个库容为5.47×108 cfu/ml且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库;并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法;获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5,亲和力分别为6.0 nmol/L和4.8 nmol/L.且在KPC-2上具有2个非竞争性结合表位.结论:成功淘选出2个不同表位的特异性纳米抗体,有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断.
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关键词
纳米抗体噬菌体展示技术KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌NanobodyPhage display technologyKPC-2 carbapenemasesKlebsiella pneumoniae
分类号
R392-33
栏目名称
论著/免疫学技术与方法
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2024.06.024
发布时间
2024-07-08
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