黄精多糖的分离纯化及其免疫调节活性研究
Separation,purification and immunomodulatory activity of polysaccharides from Polygonatum filipes
摘要目的:分离纯化长梗黄精多糖,表征其初级结构,研究其对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节活性.方法:采用超声辅助法从长梗黄精根茎中提取粗多糖,利用木瓜蛋白酶联合Sevag法除蛋白后获得黄精多糖,苯酚-硫酸法测定总糖含量;采用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、高效液相色谱(HPLC)等方法对黄精多糖进行结构分析;采用MTT、中性红、ELISA和Western blot等试验技术分别研究黄精多糖对巨噬细胞的细胞毒性、胞饮活性、TNF-α分泌、MAPK和NF-κB信号转导通路的影响.结果:超声辅助提取法的黄精多糖得率为41.61%,总糖含量为94.00%,Mw为3 125 Da,由阿拉伯糖(1.85%)、半乳糖(6.14%)、葡萄糖(56.41%)和甘露糖(35.60%)组成;体外试验表明,黄精多糖在2.5~200 μg/ml浓度下对巨噬细胞无细胞毒性,可显著增强巨噬细胞的胞饮活性,促进TNF-α的产生,提高p38、ERK、JNK、p65、IκB和IKK等蛋白的磷酸化水平,激活MAPK和NF-κB信号通路.结论:超声辅助法可以高效提取具有免疫调节活性的长梗黄精多糖,为黄精多糖作为免疫增强剂的开发应用提供基础数据.
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