换一批不同抗原表位的cTnⅠ单克隆抗体对cTnⅠ-TnC复合物亲和性的研究
Studies on affinity of cTnⅠ monoclonal antibody with different epitopes to cTnⅠ-TnC complex
摘要目的:了解不同心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)抗原表位的单克隆抗体(MAb)对cTnⅠ-肌钙蛋白C(cTnⅠ-TnC)抗原的亲和性,筛选新型cTnⅠ特异性抗体用于临床检测试剂盒研发.方法:基于微阵列化学发光免疫分析技术平台,采用cTnⅠ-TnC抗原点样硬基质芯片,以鼠源性cTnⅠ MAb为待检抗体,HRP-羊抗鼠IgG为检测抗体,对抗原点样液、抗原点样浓度、待检抗体浓度进行实验条件优化;采用竞争法检测不同抗原表位的cTnⅠ MAb对cTnⅠ-TnC的亲和力,实验组为加入梯度浓度的cTnⅠ-TnC,对照组加入等体积稀释液,检测不同cTnⅠ MAb的反应信号,计算亲和常数.结果:最优实验条件:抗原点样液为P105,抗原点样浓度为0.1 mg/ml,待检抗体浓度为80 ng/ml;包含TnC抗体的20c6cc和7B9cc MAb亲和性最好,其中20c6cc MAb达3.18×106 L/mol;cTnⅠ MAb中位于肽链C端的a.a.r 130～145、169～178和190～196区域的cTnⅠ MAb表现出较好的亲和力,其中MAb 625(a.a.r 169～178)为6.37×105 L/mol,在cTnⅠ MAb中亲和性最强.结论:cTnⅠ肽链C端a.a.r 130～145、169～178、190～196和TnC区的MAb与cTnⅠ-TnC抗原的亲和性较好,针对该区域设计新型cTnⅠ补位抗体,可作为解决自身抗体及肽链蛋白水解负性干扰的新思路.
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分类号
R446.4（诊断学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2025.01.028
发布时间
2025-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
PWGw2020-02:上海市浦东新区公共卫生学科:预防医学与检验学
上海市卫生健康委员会面上项目（202040165）
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