换一批CRMP1基因慢病毒干扰质粒构建及其对SH-SY5Y细胞NLRP3炎症小体蛋白表达的影响
Construction of CRMP1 lentiviral interference plasmid and its effect on expression of NLRP3 inflammasome protein in SH-SY5Y cells
摘要目的:构建靶向坍塌反应调节蛋白1(CRMP1)基因的慢病毒干扰质粒,建立稳定敲减CRMP1的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)稳转细胞系,探讨其对NLRP3炎症小体蛋白表达的影响.方法:以h-CRMP1 mRNA为靶序列设计合成shRNA双链,克隆至PLKO.1载体,构建CRMP1重组干扰质粒.将重组正确的shCRMP1质粒转染HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得的慢病毒上清浓缩后感染SH-SY5Y细胞,Western blot检测SH-SY5Y细胞内CRMP1的干扰效果及其对NLRP3炎症小体各组分蛋白表达的影响.结果:DNA测序结果显示,pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒构建成功;转染HEK-293T细胞包装慢病毒后,细胞内CRMP1蛋白表达下降;慢病毒浓缩液感染SH-SY5Y细胞经嘌呤霉素筛选,Western blot发现shCRMP1慢病毒能显著下调SH-SY5Y细胞中CRMP1蛋白表达.同时稳定敲减CRMP1的SH-SY5Y细胞系中发现,MPP+诱导下,抑制CRMP1表达可有效抑制NLRP3炎症小体活化.结论:成功构建pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒,且干扰CRMP1可抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞NLRP3炎症小体活化,为进一步研究CRMP1在帕金森病等神经退行性疾病中的发生机制奠定基础.
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关键词
坍塌反应调节蛋白1慢病毒干扰人神经母细胞瘤细胞NLRP3炎症小体Collapse response regulatory protein 1Lentivirus interferenceHuman neuroblastoma cellsNLRP3 inflammasome
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2025.02.029
发布时间
2025-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广西自然科学基金项目（2021GXNSFAA075004）
广西自然科学基金项目（2022GXNSFAA035456）
广西自然科学基金项目（2017GXNSFAA198003）
桂林医学院硕士研究生科研项目（GYYK2023009）
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