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NIH3T3-CD40L-IL-2-IL-4-IL-21-BAFF细胞系的稳定建立及其在体外培养B细胞中的应用

Stable establishment of NIH3T3-CD40L-IL-2-IL-4-IL-21-BAFF cell line and its application to in vitro culture of B cells

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摘要目的:将CD40L、IL-2、IL-4、IL-21及BAFF表达于NIH3T3细胞,进一步优化B细胞体外培养条件.方法:利用分子克隆技术构建包含CD40L、IL-2、IL-4、IL-21、BAFF基因的慢病毒表达载体,制备慢病毒并感染NIH3T3细胞,流式细胞术检测CD40L、BAFF表达,ELISA检测IL-2、IL-4、IL-21分泌水平,并对其作为饲养细胞与B细胞在体外共培养16 d,显微镜观察B细胞增殖情况,ELISA检测IgG分泌水平.结果:成功构建了NIH3T3-CD40L-IL-2-IL-4-IL-21-BAFF细胞系,该细胞系能够稳定表达CD40L、BAFF,分泌高水平的IL-2、IL-4、IL-21,与B细胞体外共培养16 d能够支持低密度B细胞高效扩增,并诱导B细胞分化为浆细胞,且其抗体分泌量高达517 ng/mL.结论:本研究成功构建了能够支持B细胞体外增殖与活化的饲养细胞系,为单克隆抗体制备奠定了良好基础.

作者韩玉洁 ^[1] 梁思辛 ^[2] 郑瑞 ^[2] 董昊 ^[1] 赵晓娟 ^[2] 王鹏举 ^[2] 李琰龙 ^[1] 杨建勋 ^[3] 杨安钢 ^[4] 阎博 ^[2] 左百乐 ^[5] 学术成果认领

作者单位新乡医学院医学技术学院,新乡 453003;空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,西安 710032 ^[1] 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,西安 710032 ^[2] 延安大学生命科学学院,延安 716000 ^[3] 空军军医大学基础医学院免疫学教研室,西安 710032 ^[4] 新乡医学院医学技术学院,新乡 453003 ^[5]

关键词饲养细胞 CD40L BAFF NIH3T3细胞体外培养 Feeder cells CD40L BAFF NIH3T3 cells In vitro culture

分类号 R392.12（医学免疫学）

栏目名称

论著/免疫学技术与方法

DOI 10.3969/j.issn.1000-484X.2026.01.027

发布时间 2026-01-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（81972870）国家肿瘤生物学重点实验室自主课题（CBSKL2022ZZ20）