换一批抗大口黑鲈IgM单克隆抗体的制备及在诺卡氏菌主要免疫原蛋白分析中的应用
Preparation of anti-IgM monoclonal antibody against largemouth bass and its application in analysis of immunogenic proteins of Nocardia analysis
摘要目的:制备抗大口黑鲈IgM单克隆抗体,并利用该抗体筛选和分析感染诺卡氏菌的鱼体血清中IgM结合蛋白,为疫苗研发及免疫防控策略提供依据.方法:基于大口黑鲈IgM重链的保守序列设计多肽抗原,并偶联载体蛋白KLH后免疫BALB/c雌性小鼠.细胞融合与亚克隆筛选获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株.间接ELISA测定腹水抗体效价,并利用Western blot检测人工感染鰤鱼诺卡氏菌的大口黑鲈血清中IgM.液质联用技术(LC-MS/MS)分析与IgM结合的细菌免疫原蛋白.结果:成功筛选出3株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(A9A12、A9H2和A12C3),传至第8代时仍能特异性识别IgM.其中,A9A12与A9H2的腹水效价达1∶7.29×105(间接ELISA).Western blot表明制备的单克隆抗体可识别感染鱼体血清中的IgM.LC-MS/MS分析显示,单抗A9A12在130～170 kD蛋白条带中检测到40种与IgM结合的诺卡氏菌蛋白,这些蛋白涉及多个重要生物功能,包括转录与翻译、代谢、脂肪酸与多聚体合成、DNA与染色体维护、酶活性、核酸相关过程以及物质转运与能量生成等.进一步比对分析发现,该条带中有4种蛋白可能是关键免疫原蛋白,分别为DNA导向的RNA聚合酶亚基β'、α-酮戊二酸脱羧酶、染色体分配蛋白Smc和钴胺素生物合成蛋白CobN.结论:本研究成功制备了高效价、稳定性良好的抗大口黑鲈IgM单克隆抗体,并利用该抗体筛选出诺卡氏菌感染相关免疫原蛋白,不仅为大口黑鲈诺卡氏菌病疫苗开发和诊断工具提供了重要线索,还为抗体疗法和细菌感染机制深入研究奠定了基础.
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关键词
大口黑鲈IgM单克隆抗体ELISA诺卡氏菌质谱分析Largemouth bassIgM monoclonal antibodyELISANocardiaMass spectrometric analysis
分类号
S91
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2026.04.028
发布时间
2026-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏现代农业重点基金项目（BE2021369）
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