摘要目的:探讨小鼠抗人CD28单克隆抗体(6E8 mAb)对Jurkat细胞辐射敏感性的影响与机制,为急性淋巴细胞白血病放疗提供参考.方法:①6E8 mAb通过诱生腹水法和Protein A免疫层析法制备和纯化,纯化产物的活性通过流式细胞术识别鉴定;②CCK8法检测5 μg/mL 6E5 mAb对Jurkat细胞体外活力的影响;③细胞分为空白对照组、6E8组(5 μg/mL)、γ射线辐照3 Gy+IgG组(5 μg/mL)、γ射线辐照6 Gy+IgG组(5 μg/mL)、γ射线辐照3 Gy+GM-27197AB组(5 μg/mL)、γ射线辐照6 Gy+GM-27197AB组(5 μg/mL)、γ射线辐照3 Gy+6E8组(5 μg/mL)、γ射线辐照6 Gy+6E8组(5 μg/mL);④流式细胞术分别检测各实验组细胞凋亡情况;⑤免疫荧光法检测各实验组细胞的DNA损伤;⑥Label-free蛋白组学比较6E8 mAb与IgG同型对照组Jur-kat细胞蛋白表达的差异,平行反应监测(PRM)验证;⑦将质谱筛选的差异蛋白进行GO注释及KEGG富集分析.结果:①获得浓度为2.4 mg/mL的6E8 mAb,其与Daudi肿瘤细胞的阳性结合率为92.3%;②5 μg/mL 6E8 mAb对Jurkat细胞无毒性,不影响细胞活力;③与IgG对照组相比,6E8显著提高了γ射线照射导致的Jurkat细胞凋亡率(P<0.01);④与IgG对照组相比,6E8 mAb实验组辐射引发的DNA损伤程度显著增强;⑤与IgG对照组相比,6E8 mAb组有139个蛋白表达显著差异,59个上调,80个下调,PRM验证与蛋白组学结果相符;⑥经过GO分析,差异蛋白主要涉及mRNA分解代谢过程、凋亡信号通路的调控、DNA结合调控等生物学过程;差异蛋白主要定位于核蛋白体亚单位、核糖体、线粒体内膜等细胞器;在分子功能方面,多数参与调节核糖体的结构成分、酶抑制剂的活性等功能.KEGG富集分析显示差异蛋白主要参与Jurkat细胞凋亡相关的通路,如凋亡、自噬、细胞衰老、GnRH、Hippo、MAPK、核苷酸切除修复、EGFR、VEGF等.结论:6E8 mAb通过与Jurkat细胞膜表面的CD28分子特异性结合改变蛋白表达谱及凋亡通路,增强辐射敏感性,促进细胞凋亡.