基于转录组测序分析白藜芦醇抗巨噬细胞焦亡的潜在作用机制
Analysis of potential mechanism of resveratrol against macrophage pyroptosis based on transcriptome sequencing
摘要目的:研究白藜芦醇(RSV)抗巨噬细胞焦亡的潜在作用机制.方法:采用脂多糖和尼日利亚菌素(Nig)联合处理诱导THP-1巨噬细胞焦亡,通过光学显微镜观察细胞形态变化;微板法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶的释放;Western blot检测细胞中GSDMD-N蛋白表达.采用转录组测序法对RSV处理的巨噬细胞焦亡模型进行转录组测序,并分析筛选出差异表达基因.通过qRT-PCR验证GSDMD、Caspase-1、NLRP3、IL-1β及TNF-α相关基因的表达.结果:RSV能改善脂多糖和Nig诱导的THP-1巨噬细胞形态,降低细胞培养液中LDH释放率,下调细胞GSDMD-N蛋白表达水平.测序分析共获得9 000多个显著差异表达基因,其中差异基因的数量在空白组/模型组最多,2 708个上调,2 551个下调.GO分析和KEGG分析结果显示RSV主要参与免疫反应、种间相互作用、生物间防御反应等生物过程,并调控细胞焦亡相关NOD样受体信号通路.qRT-PCR验证结果表明RSV预处理焦亡细胞可以明显降低NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β及TNF-α基因的表达.结论:RSV可以抑制巨噬细胞焦亡,可能与抑制NOD样受体信号通路有关.
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