摘要目的:克隆、表达、纯化屋尘螨核糖体蛋白P2样蛋白(Der p RP2),鉴定其免疫活性并初步探讨其致炎机制.方法:提取屋尘螨总RNA,RT-PCR扩增Der p RP2基因,构建pET-28a(+)-Der p RP2质粒,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达和纯化后,12%SDS-PAGE和IgG-Western blot(IgG-WB)鉴定重组蛋白Der p RP2;IgE-ELISA检测其与尘螨过敏患者血清特异性IgE结合,鉴定其免疫反应性;将0、10、20、30、40 μg/mL rDer p RP2与人支气管上皮细胞BEAS-2B共培养,qPCR检测IL-25、IL-33 mRNA表达;30 μg/mL rDer p RP2处理BEAS-2B细胞后进行转录组测序,qRT-PCR检测验证炎症相关基因表达.结果:RT-PCR扩增出长度为342 bp的条带.SDS-PAGE和IgG-WB结果显示,pET-28a(+)-Der p RP2原核表达成功,纯化获得的重组蛋白分子量约为16 kD.IgE-ELISA结果显示rDer p RP2特异性IgE阳性率为14.29%.rDer p RP2作用于BEAS-2B细胞,qPCR显示IL-25(F=33.48,P<0.000 1)和IL-33(F=7.57,P<0.01)mRNA表达升高.转录组测序显示,30 μg/mL rDer p RP2处理BEAS-2B细胞导致200个基因上调,129个基因下调.GO注释分析表明,差异表达基因(DEGs)主要富集于钙离子应答、金属离子应答、脂质氧化代谢及免疫相关生物过程和分子功能.KEGG通路富集分析表明,DEGs在花生四烯酸代谢、脂质与动脉粥样硬化、ABC转运体、抗原处理、自然杀伤细胞毒作用等典型免疫和代谢通路中显著富集.qPCR结果与转录组测序一致,rDer p RP2显著上调炎症相关基因SULF1、TNFSF10、HLA-C和S100A4表达,并下调RNH1表达(均P<0.01).结论:获得了屋尘螨Der p RP2重组蛋白,血清学实验证明其具有免疫反应性,细胞实验和转录组测序提示其具有免疫原性,可能是过敏原新组分,为过敏原组分诊断和免疫治疗提供了理论依据.