摘要目的 探索急性颈动脉血栓性闭塞(ACTO)形成后,血栓动态演变过程中巨噬细胞的浸润行为变化.方法 选用健康雄性新西兰大白兔15只,通过使用氯化铁处理后的外科缝合线对兔颈动脉造成损伤来建立ACTO模型.采用随机数字表法将所有兔按照实验终点时间分为5组;术后24h组及术后1、4、8、12周组,每组3只.术后24h,使用DSA检查ACTO模型建立情况.到达实验时间终点时对该组3只兔进行血栓栓塞段动脉取材并用石蜡包埋.采用苏木素-伊红(HE)染色和马休黄猩红蓝(MSB)对血栓样本进行染色,分析血栓形态和血栓组成(包括红细胞、纤维蛋白和胶原纤维)的变化,使用Orbit Imaging Analysis软件对血栓组成成分进行半定量分析.使用免疫组织化学对血栓中MO和M2型巨噬细胞的分布进行检测,依据检测结果总结ACTO发生后不同时期血栓的形态、组成及血栓中巨噬细胞浸润行为的动态演变规律.结果 术后24 h DSA结果显示,所有的实验兔均成功建立了 ACTO模型.(1)HE染色结果显示,在术后24h至1周的时间段内,血栓呈持续增大趋势;术后4周时,血栓开始出现溶解现象;术后8周时,血栓内部观察到了新生血管的形成;而术后12周时,血栓开始呈现出纤维化的迹象.(2)MSB染色结果显示,在血栓形成的急性期(术后24h内),红细胞为主要成分;在此之后,以纤维蛋白和胶原纤维为主要成分.(3)MO型巨噬细胞(细胞表面标志物为CD206)检测结果显示,术后24h,血栓中MO型巨噬细胞并未均匀分布于整个血栓中,而主要聚集于血栓边缘;术后1周时,血栓内MO型巨噬细胞阳性面积百分比相较于术后24 h增加[血栓边缘:(41.7±27.0)％比(24.6±16.7)％,血栓核心:(35.7±19.6)％比(11.1±10.4)％,均P＜0.001],且均匀分布于血栓内;术后4周时,血栓内MO型巨噬细胞的阳性面积百分比相较于术后1周减少[血栓边缘:(10.7±6.1)％比(41.7±27.0)％,血栓核心:(12.1±8.5)％比(35.7±19.6)％,均P＜0.001],差异均有统计学意义.术后4、8、12周,血栓内MO型巨噬细胞阳性面积百分比随时间延长无明显变化[血栓边缘的阳性面积百分比分别为(10.7±6.1)％、(8.0±7.7)％、(8.9±5.3)％;血栓核心的阳性面积百分比分别为(12.1±8.5)％、(9.5±4.2)％、(15.7±11.0)％],差异均无统计学意义(均P＞0.05).此外,术后12周血栓边缘M0型巨噬细胞的阳性面积百分比少于血栓核心处[(8.9±5.3)％比(15.7±11.0)％,P＜0.01)].M2型巨噬细胞(细胞表面标志物为CD206)检测结果显示,术后24 h,血栓中M2型巨噬细胞广泛分布于整个血栓内;术后1周时,血栓内M2型巨噬细胞的阳性面积百分比相较于术后24h增加[血栓边缘:(22.1±11.3)％比(11.4±8.7)％,P＜0.001;血栓核心:(24.5±9.8)％比(7.6±6.0)％,P＜0.001];术后4周,血栓内M2型巨噬细胞阳性面积百分比相较于术后1周减少[血栓边缘:(10.6±3.7)％比(22.1±11.3)％,P＜0.001;血栓核心:(9.2±4.3)％比(24.5±9.8)％,P＜0.001];术后8周血栓核心处M2型巨噬细胞的阳性面积百分比相较于术后4周时又增加[(17.9±8.8)％比(9.2±4.3)％,P＜0.001],差异均有统计学意义.而术后8周至12周血栓内M2巨噬细胞的阳性面积百分比无明显变化[血栓边缘:(9.4±6.3)％比(8.5±5.3)％,P＞0.05;血栓核心:(17.9±8.8)％比(14.4±10.0)％,P＞0.05].此外,术后8、12周时血栓核心M2型巨噬细胞阳性面积百分比均多于血栓边缘处[术后8周:(17.9±8.8)％比(9.4±6.3)％,P＜0.001;术后12周:(14.4±10.0)％比(8.5±5.3)％,P＜0.001].结论 本研究成功构建了 ACTO动物模型,首次展示了血栓形成后12周内巨噬细胞的动态演变规律.巨噬细胞在血栓形成和血栓纤维化过程中发挥着重要作用,并可能促进了血栓溶解和血栓内新生血管形成,进而促进闭塞血管自发再灌注的发生.本研究结果有待进一步验证.