换一批应用融合标签技术提高乳糖酶在毕赤酵母中的分泌表达
Improvement of Lactase Secretion Level by Fusion Expression with Tag in Pichia pastoris
摘要双歧杆菌来源的乳糖酶具有催化效率高,安全性好等优点,在乳糖水解和低聚半乳糖生产等领域中应用潜力巨大.以来源于动物双岐杆菌(Bifidobacterium animalis B106)的乳糖酶基因bg42-106m为对象,将4种标签蛋白基因cherry、cbd( cellulose-binding domains)、gst( glutathione S-transferase)、mbp( maltose-binding protein)分别与bg42-106m基因连接,然后以pPIC9为载体构建融合蛋白重组表达载体,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达.结果表明,当融合Cherry标签蛋白基因后,可显著提高bG42-106M在毕赤酵母中的蛋白分泌表达量,培养基中乳糖酶活力可达到7.42 U/mL.与未融合标签的野生型菌株相比,乳糖酶bG42-106M的分泌表达量提高了290％.而其他3种标签蛋白没有提高bG42-106M的分泌表达量.
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