换一批
换一批摘要该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.) DL-6菌株中成功克隆了几丁质结合蛋白基因.PCR测序结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,其理论分子质量为58.517 ku,等电点(pI) 4.35,命名为CB P58 (Gen-Bank登录号KF234016).结构域分析结果表明,该蛋白包括1个33家族碳水化合物结合模块(CBM),2个类型3几丁质结合域(ChtBDs);用Insight Ⅱ 2005软件以同源建模的方法构建CBP58蛋白CBM33结构域的三维结构模型,Ramachandram图谱检测和三维结构评估显示模型结构合理,整体相容性较为可信;将CBP58基因构建到pET23b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)中诱导表达;利用镍柱亲和层析纯化获得重组蛋白.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达,为后期几丁质结合蛋白(CBP)的生化性质表征奠定理论基础.
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关键词
几丁质结合蛋白假交替单胞菌DL-6克隆表达纯化chitin binding proteinPseudoalteromonas sp.DL-6cloningexpresspurification
分类号
Q93
栏目名称
研究报告
DOI
10.11882/j.issn.0254-5071.2015.11.010
发布时间
2015-12-25
基金项目
国家自然科学基金项目
大连大学大学生创新创业训练计划项目
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