换一批摘要以具有几丁质降解能力菌株Chitiniphilus sp.LY72的裂解多糖单加氧酶(CsLPMO)为研究对象,在克隆CsLPMO全长基因的基础上对其进行生物信息学分析,利用3种表达质粒pET-22b、pET-28a和pCold,构建CsLPMO异源表达菌株EBL-22、EBL-28和EBL-Co.重组CsLPMO蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,筛选最佳表达质粒,对其表达条件进行优化.结果表明,CsLPMO是一种裂解性多糖单加氧酶,隶属于AA10家族.3株重组菌中,纯化重组酶蛋白相对含量分别为5.9％、4.1％、5.4％,比酶活力分别为155.42U/mg、80.26U/mg、148.29U/mg,因此,确定最佳质粒为pET-22b,菌株EBL-22表达条件为:OD600nm值至0.4时,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为0.4mmol/L后,在25℃下诱导表达16 h.在优化条件下,其可溶性蛋白含量为928.32 mg/L,比酶活力为3.34 U/mL.CsLPMO的加入可使还原糖的产量提高1.67倍.
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